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诱导表达没有目的蛋白产生是什么原因

诱导表达没有目的蛋白产生原因无非两种 一是诱导条件不适合目的蛋白的表达,可通过改变培养基,温度,诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。 二是目的蛋白的菌种有问题,可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养,或者质粒重新转化表达菌株等方法优...

IPTG诱导后一般为胞内表达。 1.检验蛋白的表达:取微量菌液,离心收获菌体,然后用PBS 之类重悬,洗涤菌体若干次,加入与菌液等量的PBS,取菌悬液与上样buffer混合,100度3min,取上清上样。对照为未诱导的菌体。 2.蛋白的可溶性鉴定:离心取菌体...

我想应该是不同的表达菌株有不同的合成酶系以及修饰和转运方式,例如大肠杆菌没有信号肽和分子伴侣,所以很多外源蛋白的表达是以包涵体形式出现在沉淀里,而酵母菌能够进行糖基化和跨膜运输,就能够外分泌可溶表达。别说是不同的菌株了,就算是...

诱导表达没有目的蛋白产生原因无非两种一是诱导条件不适合目的蛋白的表达,可通过改变培养基,温度,诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。二是目的蛋白的菌种有问题,可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养,或者质粒重新转化表达菌株等方法优化...

质粒先测个序吧,这是基础,不然后面一切都白搭。我以前做个C端myc标签的真核表达载体,中间有移码了,但用anti-myc做Western仍能检测到微量的目大小的条带,而将移码缺失补上后,目的条带变强了很多。可能的原因是移码时发生了小比例的 ribosom...

用甲醇诱导毕赤酵母表达目的蛋白前,为什么用甘油扩菌 酵母表达系统作为一种后起的外源蛋白表达系统,由于兼具原核以及真核表达系统的优点,正在基因工程领域中得到日益广泛的应用,应用此系统可高水平表达蛋白,且具有翻译后修饰功能,故被认可...

为什么prs315载体表达蛋白需要半乳糖诱导 诱导蛋白 是在环境中有诱导物(通常是酶的底物)存在的情况下,由诱导物诱导而生成的酶.例如,大肠杆菌分解乳糖的半乳糖苷酶就属于诱导酶.又如,催化淀粉分解为糊精、麦芽糖等的α-淀粉酶也是一种诱导酶,多...

不加IPTG也会有少量表达,即leaking

有两种可能,一种是大肠杆菌里本身有这么大小的蛋白,不过这个可能性太校另外一个是叫做本底表达,就是你导入后目的蛋白在未诱导情况下也会表达,这可能是大肠杆菌产生了类似IPTG的物质,这个在原核表达中是很常见的,如果本底表达量不大的话对...

最后9空质粒为什么多一条带?另外,你的蛋白如果有的话,大概是多大?和哪条marker相对?

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